Elektroforezė: kas tai yra, kam jis skirtas ir kaip jis daromas

Elektroforezė yra laboratorinė technika, kurios tikslas - atskirti molekules pagal jų dydį ir elektros krūvį, kad būtų galima diagnozuoti ligas, patikrinti baltymų ekspresiją arba nustatyti mikroorganizmus.

Elektroforezė yra paprasta ir nebrangi procedūra, naudojama laboratorijoje ir tyrimų projektuose. Pagal elektroforezės tikslą gali prireikti atlikti kitus tyrimus ir egzaminus, kad būtų galima nustatyti diagnozę, pvz.

Kam jis skirtas?

Elektroforezė gali būti atliekama keliais tikslais tiek mokslinių tyrimų projektuose, tiek diagnozuojant, nes tai yra paprasta ir nebrangi technika. Taigi elektroforezę galima atlikti:

• Identifikuokite virusus, grybelius, bakterijas ir parazitus, dažniausiai taikomus mokslinių tyrimų projektuose; Tėvystės testą; patikrinkite baltymų išraišką; nustatykite mutacijas, kurios yra naudingos, pavyzdžiui, diagnozuojant leukemiją; analizuokite cirkuliuojančio hemoglobino tipus naudinga diagnozuojant pjautuvo pavidalo ląstelių anemiją; Įvertinkite baltymų kiekį kraujyje.

Atsižvelgiant į elektroforezės tikslą, gydytojui gali prireikti atlikti kitus papildomus tyrimus, kad diagnozė būtų baigta.

Kaip tai daroma

Elektroforezei atlikti reikia gelio, kuris gali būti iš poliakrilamido arba agarozės, priklausomai nuo objektyvo, elektroforezės buferio ir muilo, molekulinio svorio žymeklio ir fluorescencinio dažo, be UV ar LED šviesos įrangos, dar žinomos kaip transiluminatorius.

Paruošus gelį, reikia įdėti tam tikrą daiktą, kad šuliniai būtų sudaryti į gelį, liaudiškai vadinamą šukomis, ir leisti geliui nusistovėti. Kai gelis paruoštas, medžiagas tiesiog tepkite ant šulinėlių. Tam vienoje iš šulinėlių turi būti įdėtas molekulinio svorio žymeklis, teigiama kontrolė, tai yra žinoma medžiaga, kas tai yra, neigiama kontrolė, užtikrinanti reakcijos pagrįstumą, ir analizuojami mėginiai. Visi mėginiai turi būti sumaišyti su fluorescenciniu dažikliu, nes tokiu būdu galima vizualizuoti juostas ant transilluminatoriaus.

Gelis su mėginiais turi būti dedamas į elektroforezės indą, kuriame yra specifinis buferinis tirpalas, o tada prietaisas įjungiamas taip, kad būtų elektros srovė ir, atitinkamai, potencialo skirtumas, o tai svarbu atskyrimui. dalelės pagal jų apkrovą ir dydį. Elektroforezės veikimo laikas skiriasi priklausomai nuo procedūros tikslo ir gali trukti iki 1 valandos.

Pasibaigus nustatytam laikui, galima pamatyti elektroforezės išbėrimo pro transilluminatorių rezultatą. Kai želė dedama ultravioletinėje arba LED šviesoje, galima vizualizuoti juostos modelį: kuo didesnė molekulė, tuo mažesnė jos migracija, artėjant prie šulinio, o kuo šviesesnė molekulė, tuo didesnis migracijos potencialas..

Kad reakcija būtų patvirtinta, turi būti vizualizuotos teigiamos kontrolės juostos, o neigiamos kontrolės metu nieko neturi būti vizualizuota, nes priešingu atveju tai rodo, kad buvo užteršimas, ir visas procesas turi būti pakartotas.

Elektroforezės tipai

Elektroforezė gali būti atliekama įvairiais tikslais ir, atsižvelgiant į jos paskirtį, gali būti naudojami keli gelio tipai, iš kurių labiausiai paplitę yra poliakrilamidas ir agarozė.

Elektroforezė mikroorganizmams identifikuoti dažniau atliekama tyrimų laboratorijose, tačiau diagnostikos tikslais elektroforezė gali būti naudojama nustatant hematologines ligas ir ligas, kurios išsivysto padidėjus baltymų kiekiui, ir yra pagrindinės elektroforezės rūšys.:

1. Hemoglobino elektroforezė

Hemoglobino elektroforezė yra laboratorinė technika, atliekama siekiant nustatyti įvairius hemoglobino tipus, cirkuliuojančius kraujyje, leidžiančius nustatyti ligų, susijusių su hemoglobino sinteze, buvimą. Hemoglobino tipas nustatomas atliekant elektroforezę, esant konkrečiam pH, idealiu atveju - nuo 8, 0 iki 9, 0, tikrinant juostų modelį, kurį galima palyginti su įprastu modeliu, leidžiant nustatyti nenormalių hemoglobinų buvimą.

Kam tai atliekama: Hemoglobino elektroforezė atliekama siekiant ištirti ir diagnozuoti ligas, susijusias su hemoglobino sinteze, tokias kaip pjautuvinių ląstelių anemija ir hemoglobino C liga, be to, kad jos būtų naudingos diferencijuojant talasemiją. Sužinokite, kaip interpretuoti hemoglobino elektroforezę.

2. Baltymų elektroforezė

Baltymų elektroforezė yra egzaminas, kurio reikalauja gydytojas, kad būtų galima įvertinti kraujyje cirkuliuojančių baltymų kiekį ir tokiu būdu nustatyti ligas. Šis tyrimas atliekamas iš kraujo mėginio, kuris centrifuguojamas, kad būtų gauta plazma - kraujo dalis, kurią, be kitų medžiagų, sudaro baltymai.

Po elektroforezės gali būti vizualizuotas juostų modelis ir grafikas, kuriame nurodomas kiekvienos baltymų frakcijos kiekis, kuris yra pagrindinis diagnozės nustatymo pagrindas.

Kam tai daroma: Baltymų elektroforezė leidžia gydytojui ištirti išsėtinės mielomos, dehidratacijos, cirozės, uždegimo, kepenų ligos, pankreatito, vilkligės ir hipertenzijos pasireiškimus pagal juostos modelį ir tyrimo ataskaitoje pateiktą diagramą..

Supraskite, kaip tai daroma ir kaip suprasti baltymo elektroforezės rezultatą.